WSL-1850_CytoWatcher Ⅱの使用方法

CytoWatcherⅡ/CytoWatcherⅡ FL は、生きたままの細胞や組織を、ダメージを与えることなく、長期間にわたって撮影できるデジタル顕微鏡です。省スペース、省電力設計なので、CO2インキュベータ内にコンパクトに収まり、環境温度への影響を最小限に抑えます。明視野撮影はもちろんのこと、蛍光撮影にも対応しており、再現性抜群のカラー撮影は組織切片や生体組織などの観察にも適しています。

Wound healing assay

コンフルエントのNIH3T3細胞にチップでひっかき傷（創傷）を作り、修復される様子をCytoWatcherⅡにより10分間隔でインターバル撮影しました。細胞が躍動的に移動する様子が観察できます。

GFP発現細胞の蛍光撮影

EGFP発現ベクターを導入してから20時間後のNIH3T3細胞を、CytoWatcherⅡ FLで撮影したイメージを示しています。遺伝子導入後、18～30時間後をインターバル撮影により撮影しました。

CytoWatcherⅡで採用したCMOSイメージセンサーは、従来のセンサーより性能が向上し、今まで以上にきれいな画像を撮影できるようになりました。センサーの受光部には裏面照射構造と遮光構造を採用し、画素サイズ(面積)も1.6倍大きくなったことによって、感度や飽和特性が改善され、ノイズを抑制することもできました。またグローバルシャッター方式(被写体の全体を同時に取り込んでから出力するセンサー方式)を採用して、高速に動く被写体を撮影しても、画像がひずむことなく、実態通りに高精度な画像が得られます。
　
右図は、GFP発現NIH3T3細胞を、CytoWatcher FLとCytoWatcherⅡ FLで撮影した画像（左：4ｘ）と四角で囲った部分を拡大したイメージ（中央）を示しています。明視野像は同じ細胞の異なる視野を蛍光像と同様に拡大したイメージです（右）。
CytoWatcherⅡ FLは従来のCytoWatcher FLと比べると撮影エリアが1.6倍に拡張されました。画像解像度は従来機と同様の500万画素のまま、画素サイズが大きくなったことにより、感度よく撮影できます。

CytoWatcherⅡは、設置面積が96ウェルプレート2枚分に相当する、B6サイズの省スペースです。背も低く、とてもコンパクトなので、CO₂インキュベータ内に設置しても場所を取りません。
また防湿構造なので、95%以上の高湿度環境であるCO₂インキュベータ内に設置し、長期間の撮影に対応しています。撮影時だけ、装置が駆動し、ライトが点灯してカメラがONになり撮影します。不要な熱の発生源になることもなく、環境温度への影響は最小限に抑えられます。

CytoWatcherⅡはWindows PCとUSB3.0ケーブルで接続するだけで撮影できます。
1台のPCに2台のCytoWatcherⅡを接続して、同じ撮影条件で、同じタイミングで撮影することが可能です。複数の培養条件や、コントロールとの比較実験等を行うときに便利な機能です。

CytoWatcherⅡ FLには励起用の青色LED光源（465 nm）が搭載され、励起光源用ショートパスフィルター（480 nm）と蛍光撮影用バンドパスフィルター（525/45 nm）が設置されています。生細胞内のGFPなどの緑色蛍光を生きたまま経時的に撮影できます。同一細胞で明視野と蛍光像のタイムラプス撮影も可能です。
　
また低倍率レンズにより、視野サイズが大きく、実体顕微鏡よりも解像度が高いため、精密な画像が撮影できます。高性能なカラーCMOSセンサーにより、動物の組織切片や植物組織など、実際の組織の色と同様の再現性の高いカラー撮影ができます。

NIH3T3細胞の増殖

10cmディッシュに継代したマウス線維芽細胞NIH3T3を30分間隔で72時間撮影

脂肪細胞様細胞(Adipocyte-like cells)への分化誘導

6cmディッシュで培養したマウス線維芽細胞Swiss 3T3 L-1の培地を分化誘導用の培地（DMEM, 10%FBS, 250nM Dexamethazone, 0.5mM Isobutylmethylxanthin, 10ug/mL Insulin）に交換後、1時間間隔で7日間撮影

創傷治癒アッセイ (Wound healing assay)

35mmディッシュで100%コンフルエントまで培養したマウス線維芽細胞NIH3T3の細胞層に引っかき傷を付けた後、30分間隔で24時間撮影

ウシ体外受精卵のタイムラプス撮影

受精後6時間のウシの体外受精卵を30分間隔で9日間撮影
データご提供：　酪農学園大学　今井敬先生