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セミドライブロッティング試薬の選び方
アトーでは、目的に合わせたさまざまなセミドライブロッティング試薬をそろえました。
今回は、特長別に製品をご紹介します。
トランスファーパック | セミドライブロッティング試薬 | タンク式ブロッティング試薬 | ||||
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型式 | WSE-4056/57/58 | WSE-7210 | AE-1465 | AE-1460 | WSE-7055 | |
名称 | QBlot kit C/M/W | EzFastBlot HMW | EzFastBlot | EzBlot | EzRun TG | |
操作性 | ★★★★★ | ★★★☆☆ | ★★★☆☆ | ★★☆☆☆ | ★★☆☆☆ | |
転写時間 | ★★★★★ | ★★☆☆☆ | ★★★★★ | ★★☆☆☆ | ★☆☆☆☆ | |
転写効率 | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | |
高分子タンパク質 | ★★★★☆ | ★★★★★ | ★★☆☆☆ | ★★★☆☆ | ★★★★★ | |
分子量範囲 | ~250kDa | ~600kDa | 低分子~200kDa | ペプチド~250kDa | 低分子~200kDa | |
最短転写時間 | 5分 (24V) |
30分 (25V) |
10分 (6mA/cm2 or 25V) |
30分 (2mA/cm2) |
60分 (高電圧) |
セミドライブロッティングについて
ウエスタンブロッティングは、電気泳動で分離したゲル中のたんぱく質を、膜に移して検出する実験方法です。ウエスタンブロッティングには、大きく分けて『セミドライ式』と『ウェット式(タンク式)』の2種類の方法があります。
セミドライ式ブロッティングとは、平らな電極板の間に、ブロッティング溶液を含ませたろ紙、膜(メンブレン)、電気泳動後のゲルを積層して密着させ、電気を流してゲル中の試料を膜上に移行させる手法です。
セミドライ式ブロッティングは、ブロッティング溶液をろ紙に含ませるだけなので、タンク式に比べて少量の溶液量で行うことができます。また過電流や発熱の心配も少ないので、冷却装置などが必要ありません。
アトーではこのような特長を基に、セミドライ式を推奨しています。
参考データ
様々なアトー製トランスファーバッファーを用いてブロッティングを行った後のブロッティング膜とゲルをEzStain AQua (CBB) で染色した結果です。EzRunTG(従来のTowbin 法によるトランスファーバッファー)よりもEzBlot、EzFastBlot、EzFastBlot HMW はセミドライ式でも高効率にタンパク質バンドをトランスファーできます。EzFastBlot は約10 分の短時間で~ 200kDa までのタンパク質をトランスファーするのに適しており、EzFastBlot HMW は200kDa 以上の高分子タンパク質も約30 分間という短時間で、タンク式のブロッティングと同等以上の効率でトランスファーできます。またEzBlot はタンパク質をシャープなバンドで明瞭にトランスファーするのに適しています。
セミドライブロッティングの基本操作
実験ステップ | |
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ブロッターの下部電極板にブロッティング溶液を染み込ませたろ紙をセットします。 |
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ろ紙の上に親水化・平衡化済みのPVDF膜をセットします。 |
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PVDF膜の上にゲルをセットします。 |
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ゲルの上にブロッティング溶液を染み込ませたろ紙をセットします。 ろ紙の上から、ブロッティングローラーを転がせ、過剰なブロッティング溶液を取り除き、密着させます。 |
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通電し、ブロッティングを開始します。 |
操作説明動画も、せひご覧ください!
関連製品
型式 | 製品名 | 取扱説明書 | SDS | 各種コンテンツ |
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WSE-7055 | 電気泳動バッファー、タンク式ブロッティングバッファー |
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ブロッティング試薬・消耗品 |
AE-1460 | セミドライ式ブロッティングバッファー |
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AE-1465 | セミドライ式高速ブロッティングバッファー |
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WSE-7210 | セミドライ式高分子用高速ブロッティングバッファー |
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AE-1340 | CBB染色溶液 |
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製品カタログ |
簡単!失敗なし!トランスファーパック『QBlot kit シリーズ』
『QBlot kit シリーズ』は、セミドライブロッティング溶液で調製済みのPVDF膜とパットをセットでパックしたトランスファーパックです。1回分のパックの封を切り、電気泳動後のゲルをのせればすぐにブロッティングが可能です。通常、ウエスタンブロッティングのろ紙やメンブレンは、ブロッティングバッファーになじませる平衡化作業が必須です。これには15~30分程度の時間を要します。『QBlot kit シリーズ』なら面倒な平衡化は必要なく、封を切ればすぐにウエスタンブロッティングに使用可能です。専用ブロッティングバッファーにより転写効率も高く、短時間で高効率のウエスタンブロッティングが可能です。また専用の給水パットを使用しているため、転写ムラや気泡ぬけの失敗も少なく、どなたでも簡単に使用することができます。
参考データ
上図は2.2ng/レーン~2/3希釈したヒト血漿タンパク質を電気泳動し、QBlot kit M(改良品)とQBlot kit(従来品)、EzFastBlot(ろ紙+高速転写バッファー)を用いてウエスタンブロッティングを行った結果を示しています。転写したブロッティング膜を1/10,000希釈したヒトアルブミン抗体と反応させ、EzWestLumi plusでバンドを検出しました。
QBlot kit MはEzFastBlot(ろ紙+高速転写バッファー)の半分の転写時間で同等の検出が、また同じ転写時間では、より高感度な検出が可能になりました。
QBlot kit 使用方法
実験材料
- 電気泳動後のゲル
- WSE-4057 QBlot kit M
- WSE-4025 ホライズブロット2M
- WSE-3100 パワーステーションギブリⅠ
- 蒸留水
- メスシリンダー
- 容器等
実験ステップ | |||||||||||
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Gel Wash Buffer を蒸留水で 5 倍希釈し、1× Gel Wash Buffer を調製します。 |
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QBlot kit の Bottom Stackを取り出します。 |
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Bottom Stackをホライズブロットの陽極板の上にセットします。 |
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電気泳動後のゲルを、1× Gel Wash Buffer で軽くすすぎ、Bottom Stack の上にセットします。 |
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Top Stack をゲルの上に積層します。 |
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ブロッティングローラーで気泡をぬき、しっかり密着させます。 |
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ホライズブロットの上部電極板をセットします。 |
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リード線を接続し、パワーステーションギブリⅠとつなげます。以下の表を参考に条件を設定し、ブロッティングを開始します。
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★ 操作説明動画もご覧ください!
関連製品
型式 | 製品名 | 取扱説明書 | SDS | 各種コンテンツ |
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WSE-1150 | PAGE スラブ電気泳動装置 |
「高速ハイレゾ電気泳動」カタログ |
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WSE-4115 | 電源付きセミドライブロッティング装置 |
ブロッティング装置 手のひらサイズの実験装置!コンパクトシリーズのご紹介 |
||
WSE-4025 | セミドライ式ブロッティング装置 |
ブロッティング装置 |
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WSE-3100 | 電源装置 |
電源装置シリーズ |
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WSE-7120 | 高感度HRP用発光基質 |
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ウエスタンブロッティングHRP用高感度発光基質 |
WSE-6300 | 超高感度化学発光撮影装置 |
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高分子タンパク質を高速転写するなら!『EzFastBlot HMW』
『EzFastBlot HMW』は、200kDa 以上の高分子量タンパク質を、高速ブロッティングできるセミドライブロッティング試薬です。
使いやすい1液系で、メタノールを使用しない組成のため、廃液処理に手間もかかりません。
参考データ
上図は EzFastBlot HMW と自作の転写バッファー(100mM Tris / 192mM Glycine / 10% MeOH)を用いてブロッティングを行った後のブロッティング膜を染色した結果です。
自作転写バッファーに比べてEzFastBlot HMWでは240kDa 以上の高分子側バンドが濃く転写されていることが確認できました。このようにセミドライ式でもタンク式と同等の転写効率の高さが確認できました。
EzFastBlot HMW 使用方法
実験材料
- 電気泳動後のミニサイズゲル
- WSE-7210 EzFastBlot HMW
- WSE-4025 ホライズブロット2M
- WSE-3100 パワーステーションギブリⅠ
- CB-09A アブソーベントペーパー 85×90mm 6枚
- WSE-4051 クリアブロット・P+膜 85×90mm 1枚
- 蒸留水
- メスシリンダー
- 容器
実験ステップ | |
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EzFastBlot HMW を蒸留水で 5 倍希釈し、ワーキング溶液(ブロッティングバッファー)を調製します。 |
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PVDF膜の親水化、平衡化を行います。
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ろ紙より一回り大きい容器を用意し、ブロッティング バッファーを約 50mL 入れ、CB-09A(ろ紙)を 6枚浸漬します。 ※他社ろ紙を用いる場合は、ゲルと同じサイズに切断し、合計で約 6mm 厚以上となる枚数を準備します。
左図のように、ろ紙、PVDF膜、ゲルを積層します。 |
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ブロッティングバッファーに浸漬した 3枚のろ紙を、ホライズブロットの陽極板の上にセットします。 その上に、親水、平衡化済みのPVDF膜をセットします。 |
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電気泳動後のゲルをブロッティングバッファーで軽くすすぎ (数分以内)、PVDF膜の上にセットします。 |
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ブロッティングバッファーに浸漬した 3枚のろ紙を、ホライズブロットの陽極板の上にセットします。 ブロッティングローラーで気泡をぬき、しっかり密着させます。 |
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ホライズブロットの上部電極板をセットします。 |
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リード線を接続し、パワーステーションギブリⅠとつなげます。以下の表を参考に条件を設定し、ブロッティングを開始します。
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関連製品
型式 | 製品名 | 取扱説明書 | SDS | 各種コンテンツ |
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WSC-2400 | 振とう器 |
カタログ |
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WSE-4050~4054 | ブロッティング用PVDF膜 |
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ブロッティング試薬・消耗品 |
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WSE-4060~4064 | ブロッティング用PVDF膜 |
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Total Proteinによるノーマライズ ブロッティング試薬・消耗品 |
短時間で転写を終わらせたい!高速転写するなら『EzFastBlot』
『EzFastBlot』は、セミドライブロッティング時間を大幅に短縮可能な高速ブロッティング試薬です。
使いやすい1液系で、メタノールを使用しない組成のため、廃液処理に手間がかかりません。
参考データ
上図は125ng/レーン~1/2希釈したヒト血漿タンパク質を電気泳動し、EzFastBlot と、自作の転写バッファー(100mM Tris / 192mM Glycine / 10% MeOH)を用いてウエスタンブロッティングを行った結果を示しています。
転写したブロッティング膜を 1/4,000 希釈したヒトトランスフェリン抗体および 1/10,000 希釈したHRP標識2次抗体と反応させ、EzWestLumi plusでバンドを検出しました。
EzFastBlot は自作の転写バッファーに比べ、短時間で高効率の転写が可能であることが確認できました。
EzFastBlot 使用方法
実験材料
- 電気泳動後のミニサイズゲル
- AE-1465 EzFastBlot
- WSE-4025 ホライズブロット2M
- WSE-3100 パワーステーションギブリⅠ
- CB-09A アブソーベントペーパー 85×90mm 4枚
- WSE-4051 クリアブロット・P+膜 85×90mm 1枚
- 蒸留水
- メスシリンダー
- 容器
実験ステップ | |
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EzFastBlot HMW を蒸留水で 5 倍希釈し、ワーキング溶液(ブロッティングバッファー)を調製します。 |
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PVDF膜の親水化、平衡化を行います。
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ろ紙より一回り大きい容器を用意し、ブロッティング バッファーを約 50mL 入れ、CB-09A(ろ紙)を 4枚浸漬します。 ※他社ろ紙を用いる場合は、ゲルと同じサイズに切断し、合計で約 4mm 厚以上となる枚数を準備します。 ※お使いのブロッティング装置により、ろ紙の枚数が異なります。取扱説明書をご覧ください。 左図のように、ろ紙、PVDF膜、ゲルを積層します。 |
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ブロッティングバッファーに浸漬した 2枚のろ紙を、ホライズブロットの陽極板の上にセットします。 その上に、親水、平衡化済みのPVDF膜をセットします。 |
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電気泳動後のゲルをブロッティングバッファーで軽くすすぎ (数分以内)、PVDF膜の上にセットします。 |
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ブロッティングバッファーに浸漬した 2枚のろ紙を、ホライズブロットの陽極板の上にセットします。 ブロッティングローラーで気泡をぬき、しっかり密着させます。 |
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ホライズブロットの上部電極板をセットします。 |
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リード線を接続し、パワーステーションギブリⅠとつなげます。以下の表を参考に条件を設定し、ブロッティングを開始します。
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関連製品
型式 | 製品名 | 取扱説明書 | SDS | 各種コンテンツ |
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WSC-2400 | 振とう器 |
製品カタログ |
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WSE-4050~4054 | ブロッティング用PVDF膜 |
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ブロッティング試薬・消耗品 |
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WSE-4060~4064 | ブロッティング用PVDF膜 |
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Total Proteinによるノーマライズ ブロッティング試薬・消耗品 |
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WSE-7120 | 高感度HRP用発光基質 |
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ウエスタンブロッティングHRP用高感度発光基質 |
WSE-6300 | 超高感度化学発光撮影装置 |
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より高い効率を求めるなら!『EzBlot』
『EzBlot』は、3溶液系のブロッティング試薬で、効率の高い転写が可能なブロッティング試薬です。
低分子から高分子に至るまで、効率の高い転写が可能です。
不連続系のバッファー組成のため、一般的に転写されにくいと言われる塩基性タンパク質や複合タンパク質も、効率よく転写することができます。
参考データ
上図は分子量マーカーとタンパク質を電気泳動し、EzBlot を用いてセミドライブロッティングした膜とタンク式ブロッティングをした膜を染色した結果です。枠で囲んだ部分の分子量マーカー EzProtein Ladder が、低分子から高分子に至るまですべてのバンドが抜けることなく転写できていることがわかります。このようにセミドライ式でもタンク式と同等の転写効率の高さが確認できました。
EzBlot 使用方法
実験材料
- 電気泳動後のミニサイズゲル
- AE-1460 EzBlot
- WSE-4025 ホライズブロット2M
- WSE-3100 パワーステーションギブリⅠ
- CB-09A アブソーベントペーパー 85×90mm 6枚
- WSE-4051 クリアブロット・P+膜 85×90mm 1枚
- 蒸留水
- メスシリンダー
- 容器
実験ステップ | |
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使用時に ブロッティングバッファー A、B、C液のボトル1本に対してメタノールを25mLずつ添加します。 メタノール添加後はラベルのチェックボックスにチェックを入れ、冷蔵保存してください。 メタノールを添加すると1×ワーキング溶液(ブロッティングバッファー)となりますので、そのままご使用ください。 |
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PVDF膜の親水化、平衡化を行います。
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付属のディスポーザブルトレイを2枚用意し、ブロッティングバッファー A、C液を各50mLずつ入れます。各トレイにろ紙を浸漬します。 ろ紙の枚数は以下の通りに浸漬してください。
左図のように、ろ紙、PVDF膜、ゲルを積層します。 |
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ブロッティングバッファー A液に浸漬した 2枚のろ紙を、ホライズブロットの陽極板の上にセットします。 その上に、ブロッティングバッファー B液に浸漬した 1枚のろ紙を、ろ紙の上にセットします。 ろ紙の上に、親水化、ブロッティングバッファー B液で平衡化済みのPVDF膜を、ろ紙の上にセットします。 |
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電気泳動後のゲルをブロッティングバッファーで軽くすすぎ (数分以内)、PVDF膜の上にセットします。 |
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ブロッティングバッファー C液に浸漬した 3枚のろ紙を、ゲルの上にセットします。 ブロッティングローラーで気泡をぬき、しっかり密着させます。 |
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ホライズブロットの上部電極板をセットします。 |
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リード線を接続し、パワーステーションギブリⅠとつなげます。2mA/cm2で30~60分間に設定し、ブロッティングを開始します。 |
関連製品
型式 | 製品名 | 取扱説明書 | SDS | 各種コンテンツ |
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wSE-1150 | PAGE スラブ電気泳動装置 |
「高速ハイレゾ電気泳動」カタログ |
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WSE-7020 | 分子量マーカー |
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WSC-2400 | 振とう器 |
製品カタログ |
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WSE-4050~4054 | ブロッティング用PVDF膜 |
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ブロッティング試薬・消耗品 |
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WSE-4060~4064 | ブロッティング用PVDF膜 |
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Total Proteinによるノーマライズ ブロッティング試薬・消耗品 |